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ELISA试剂盒血清、血浆、细胞样本的收集及处理方法

更新时间:2021-10-18      浏览次数:2223

1、血清:用无菌管收集,室温血液自然凝固10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000/分),仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

 

2、血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂抗凝剂,混合10-20钟后,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。


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4细胞样品前处理:

a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。

c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。

用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

2、后处理:

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的ELISA、Western和免疫沉淀等操作。



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